工业生产

哺乳动物细胞广泛用于生物制药，如抗体，疫苗，肽和次级代谢产物，以上都是通过与哺乳动物细胞进行生物加工产生的。 在从抗体研发到生产的全过程中，许多步骤需要进行基于细胞测定的评估过程或质量控制。 如总细胞浓度和细胞活率将决定细胞培养的状态。 与细胞转染一样，抗体亲和力也决定于细胞水平。 Countstar仪器是基于图像的细胞仪，可以帮助从研发到生产过程进行监控，并确保重现性和一致性。

目录

• 细胞的活率和浓度检测
• 细胞活率和GFP转染测定
• 抗体亲和力检测
• 细胞计数结果一致性和全球数据管理
• GMP-ready和符合FDA 21 CFR part 11

抗体从研发到生产的流程

细胞的活率和浓度检测

 

图1监测细胞疗法中使用的间充质干细胞（MSCs）的活率和数量。

可靠和高效的细胞检测对于优化产量和产品质量至关重要，因为即使生物过程参数的微小变化也会影响细胞培养的状态。 细胞计数和活率是最重要的参数，Countstar®Altair提供了一个非常智能化，完全符合cGMP解决方案。

Countstar®Altair的设计基于经典的台盼蓝排除原则，集成了先进的“定焦”光学成像，先进的细胞识别技术和软件算法。 通过一次运行可以获得细胞浓度，活力，聚集率，圆度和直径分布的信息。

 

 

细胞活率和GFP转染测定

在生物生产中，与GFP融合的重组蛋白经常作为指示物。 确定GFP荧光可以反映目标蛋白的表达。 Countstar Rigel为测试GFP转染以及可行性提供了一种快速简便的检测方法。 细胞用碘化丙啶（PI）和Hoechst 33342染色以确定死细胞群和总细胞群。 Countstar Rigel为同时评估GFP表达效率和活率提供了一种快速，准确的方法。

使用Hoechst 33342（蓝色）定位活细胞，并且可以准确地确定表达GFP的细胞（绿色）的百分比。 用碘化丙锭（PI;红色）染色死细胞。

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抗体亲和力检测

将抗体稀释成不同浓度，然后与细胞孵育。 结果来自Countstar Rigel（图像和定量结果）通常使用Elisa或Biacore方法测量亲和力抗体，但这些方法非常敏感，而且它们用纯化的蛋白质而不是天然构象蛋白质检测抗体。 使用细胞免疫荧光方法，用户可以检测抗体与天然构象蛋白的亲和力。 目前，可以通过流式细胞仪分析和量化抗体亲和力。 Countstar Rigel也可以提供快速简单的方法来评估抗体的亲和力。Countstar Rigel可自动捕获图像并定量，可反映抗体亲和力的荧光强度。

图：将抗体稀释成不同浓度，然后与细胞孵育。 结果来自Countstar Rigel（图像和定量结果）

 

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细胞计数结果一致性和全球数据管理

常规细胞计数中的一个常见问题是不同用户、部门和站点之间的数据差异。 所有Countstar细胞分析仪在不同的地点或生产地点计数结果CV≤5%。 这是因为在质量控制过程中，每台仪器都必须根据标准仪器进行校准。

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GMP-ready和符合FDA 21 CFR part 11

细胞凋亡可以用Annexin-V- FITC和7-ADD进行检测。磷脂酰丝氨酸（PS）通常仅见于健康细胞的质膜胞内小叶中，但在早期细胞凋亡期间，膜不对称性丧失且磷脂酰丝氨酸转位至外部小叶。 （A）MSCs凋亡检测的荧光图像 （B）通过FCS软件分析得到的MSC凋亡散点图 （C）正常细胞、凋亡细胞、坏死或极晚期凋亡细胞的百分比。

IQ/OQ 文件和验证颗粒